Langendorff离体心脏灌流系统适用于离体哺乳动物心脏灌流(langendorff氏法)和离体心脏冠脉流量(coronaryfilw.cf)的测定。可直接进行恒压灌流,加上蠕动泵可进行恒流灌流。
实验步骤:
A. 配制37℃ K-H液(1.25 CaCl2,130 NaCl,5.4 KCl,11 葡萄糖,0.5 MgCl2,0.5 NaH2PO4及25 NaHCO3),向K-H液中通入95%O2-5% CO2气体,缓冲液PH 值为7.4,并取部分K-H液放入冰箱中,使其温度降到4℃。
B.清洁Langendorff管路,每次使用前先用1000ml蒸馏水冲洗,打开水浴循环,再用K-H液将整个管路系统进行冲洗。
C.鲁米钠腹腔注射麻醉动物(100mg/kg),并向肝静脉注射100IU肝素,颈动脉放血处死动物,同时快速分离心脏,放入4℃K-H液中挤净血液并称重。
D.将心脏迅速固定在Langendorff 灌流系统中,通过主动脉以85cmH2O压力逆行灌注,通过肺静脉插入导管至左心房。
E.心脏复跳后,将一个球囊插入心脏左心室,球囊和压力换能器相连,在电脑上记录左室内压,调整左室舒张内压(LVEDP)在4~10mmHg之间。待心脏左室收缩压(LVESP)稳定后且大于80mmHg,心率大于200次/分,可继续实验,并记录心电图(ECG)、主动脉流量(AF)、冠脉流量(CF)、左室收缩末压(LVESP)等指标。
F.缺血再灌注方案:关闭灌流液,停灌心脏45min后,打开灌流液进行复灌90min(复灌起始15min通过肺静脉给予一定的压力辅助),同时记录相关指标。
G.实验结束后,用蒸馏水冲洗整个管路系统,防止K-H液残留在管路中。